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　　檢測食品中蛋白質的含量！
 

　　1) 原理
 

　　1976年由Bradford建立的考馬斯亮藍法，是根據蛋白質與染料相結合的原理設計的。這種方法是目前靈敏度高的蛋白質測定方法之一。
 

　　考馬斯亮藍G-20染料，在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料大吸收峰位置，由465nm變為595nm，溶液的顏色也由棕黑色變為蘭色。染料主要是與蛋白質中堿性氨基酸和芳香氨基酸殘基結合。
 

　　在595nm下測定的吸光度A595，與蛋白質濃度成正比。
 

　　特點
 

　　(1)靈敏度高
 

　　其罪低檢測蛋白質含量可達1mg，這是因為蛋白質與染料相結合后產生的顏色變化很大，蛋白質-染料復合物有更高的吸光系數,因而光吸收要比Folin –酚試劑法大得多。
 

　　(2) 測定快速，簡潔
 

　　只需要加一種試劑.完成一個樣品的測定，只要5分鐘左右 。由于染料與蛋白質結合的過程，大約只要2分鐘即可完成，其顏色可以在1小時內保持穩定，且在5分鐘至20分鐘之間，顏色的穩定性好。
 

　　(3) 干擾物質少。
 

　　缺點
 

　　(1) 由于各種蛋白質中的精安酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此 Bradford 法用于不同蛋白質時有較大的偏差 。
 

　　(2) 仍有一些物質干擾此法的測定，主要的干擾物質有去污劑等。
 

　　(3) 標準曲線也有輕微的非線形，因而不能用比爾定律進行計算而只能用標準曲線來測定未知蛋白質的濃度。
 

　　操作方法
 

　　1 標準曲線的繪制
 

　?、?吸標樣：吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml牛血清白蛋白標準使用液，分別置于10m1作好標記的試管中。
 

　?、?加蒸餾水：吸取1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0.0ml蒸餾水分別加入加有0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml牛血清白蛋白標準使用液的試管中。
 

　?、?加顯色劑：于標準管中分別加入5.0m1考馬斯亮藍 G- 250 試劑。
 

　?、?混溶比色：加水至刻度，混勻，靜置2min，于波長595nm處測吸光度。
 

　　⑤ 繪制標準曲線以牛血清白蛋白含量(ug)為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪出標準曲線。
 

　　樣品中蛋白質含量的測定
 

　　另取 1 支試管，準確量取 1.00ml 樣品提取液，再加入5ml 考馬斯亮藍 G- 250 試劑，充分混合，放置 2min 后，以標準曲線 1 號試管做參比，在 595 nm 波長下比色，記錄吸光度